反相色谱柱的工作原理

　　反相色谱柱的介绍：
 

　　根据流动相和固定相相对极性不同，液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用广泛，现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。
 

　　反相色谱柱的原理：
 

　　反相色谱是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越大。当固定相一定时，可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。由于反相介质表面为强烈疏水性，并且流动相为低极性的有机溶剂，生物活性大分子在反相色谱分离过程中容易变性失活，以回收生物活性蛋白质为目的时，应注意选用适宜的反相介质。
 

　　反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相。