如何减少柱外体积

发表时间：2022-09-09 点击次数：435

如何使柱外体积达到最小？

第一，进样体积。要确保把进样体积控制在最小。

第二，样品溶剂。尽量保持样品的溶剂强度等于或小于初始流动相。如果必须使用*的有机溶剂作为样品溶剂，那么要尽可能减少进样量。

第三，柱前管路。需要确保您使用的是最小内径的管路。请注意，在样品流路中使用几种不同内径的管路可能会导致额外的扩散。对于梯度分离，通常可以忽略柱前管路对柱外体积的影响，但是，这个体积会对梯度延迟体积有影响。

第四，热交换器体积。有些仪器有不同体积的热交换器可供选择。当使用高柱温时，这有助于使流动相与色谱柱之间的温度相匹配。您需要使用与流速一致的最小体积的热交换器，特别是对于2.1mm内径色谱柱。

第五，柱后管路。需要确保您使用的是最小内径的管路。请注意，在样品流路中使用几种不同内径的管路可能会导致额外的扩散。对于20-50mm 2.1mm内径的色谱柱，75或100μm内径的管路可能会提供更好的结果，但是这会产生更高背压。

第六，流通池体积。对于2.1mm和3mm内径的色谱柱，通常使用1-5μl的流通池。更大的流通池通常用于4.6mm内径更长的色谱柱。

常规HPLC仪器的优化

如果您没有UHPLC仪器，不用担心。您可以通过以下几个方面来优化您的系统以获得更高的性能。

当在常规的HPLC仪器上使用高效的SPP色谱柱（如HALO）时，我们建议您按照以下几个步骤进行系统优化。先从简单、便宜的优化开始，然后根据需要再进行更复杂和更昂贵的优化。一旦您取得了可以接受的结果，您可以选择放弃后续的优化。

第一，减少检测器的响应时间，提高数据采集频率。将检测器响应时间设置为小于0.1秒，并且数据采集频率大于20Hz。

第二，将进样体积减少到最小，并确保能达到可接受的峰值响应。

第三，确保样品溶剂强度比流动相弱。如果这不能满足，那么需要对您的进样体积有所限制。如果是梯度分离，那么您能够注入比等度分离更多的样品。然而，保持样品溶剂强度小于初始流动相的强度仍然是重要的。

第四，使用体积更小，长度更短的管路。

第五，使用更小的流通池。